近二十年來(lái)，熒光顯微鏡在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的許多領(lǐng)域內(nèi)得到了廣泛的應(yīng)用，現(xiàn)在它已經(jīng)成為一種重要的*的觀察和側(cè)試手段。一個(gè)非常重要而且廣泛應(yīng)用的技術(shù)是免疫熒光，當(dāng)用抗原一抗休相互特異作用的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行處理時(shí)，就能夠地對(duì)生物標(biāo)本中的特異結(jié)構(gòu)、特異組分進(jìn)行定位。在許多研究領(lǐng)域內(nèi)，比如細(xì)胞遺傳學(xué)中的染色體分析、神經(jīng)組織中的組織化學(xué)以及蛋白質(zhì)和核酸的定位中，熒光顯微鏡已經(jīng)變成一種重要的工具。當(dāng)能夠檢測(cè)標(biāo)本中熒光染料的很小含量時(shí)，就可以用它對(duì)組織和細(xì)胞中的一定的物質(zhì)進(jìn)行定位和定量，Rigler （ 1969）已經(jīng)能夠用這種方法確定在一個(gè)單細(xì)胞中10-36g的DNA含量。特別是當(dāng)熒光顯徽鏡與細(xì)胞光度計(jì)結(jié)合起來(lái)制造出熒光顯微光度計(jì)后，它變?yōu)橐粋€(gè)非常靈敏而又方便的細(xì)胞化學(xué)測(cè)量?jī)x器，可以地測(cè)定細(xì)胞中蛋白質(zhì)、DNA, RNA等一些組分的含量。

    在熒光顯微鏡的使用中，應(yīng)注意以下幾個(gè)問(wèn)題:

    （1）標(biāo)本。用于熒光顯微鏡的標(biāo)本不宜太厚，否則會(huì)消耗大部分激發(fā)光，而且物鏡直接觀察到的標(biāo)本上部不能得到充分的激發(fā)。另外，太厚的標(biāo)本往往因細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋，會(huì)降低像的反差和清晰度。

    （2）載玻片。載玻片的厚度一般應(yīng)在0.8-1.2mm之間，太厚的玻片不僅吸收較多的光能，而且不能使激發(fā)光在標(biāo)本平面聚焦。玻片應(yīng)光照均勻，無(wú)油跡，無(wú)劃痕。否則，將會(huì)出現(xiàn)雜亂的非特異熒光，影響觀察和判斷。使用很薄的對(duì)紫外光有很好通透性的石英玻片。

    （3）蓋玻片。所用蓋玻片可以是一般的玻瑞，因?yàn)橹挥性诳梢?jiàn)光范圍內(nèi)的熒光對(duì)于像是重要的。為了加強(qiáng)激發(fā)光，用干涉蓋玻片，它可以讓熒光順利通過(guò)，而反射激發(fā)光。被反射回來(lái)的激發(fā)光又可以再次激發(fā)標(biāo)本。

    （4）封藏劑。封藏劑必須是無(wú)熒光、無(wú)顏色的，通常使用優(yōu)級(jí)分析純甘油鹽水緩沖液（90%甘油，10%磷酸鹽緩沖液，pH7.1-3.6 ）。為了固定蓋玻片，可用。.5%明膠，加到玻片以后以10%福爾馬林固定，也可用淀粉青。另外，還可以使用水、甘油、阿拉伯樹(shù)膠、糖漿和液體石蠟等。加拿大樹(shù)膠具有熒光性，因而不能作封藏劑。

    （5）浸油。在普通顯微鏡中所用的香柏油是不能直接使用的，必須加入一定童的硝基苯（熒光熄滅劑）才勉強(qiáng)可用，但效果不好;純植香油是比較好的浸油，另外液體石蠟和純甘油（加10%磷酸鹽緩沖液）是比較好的代用品，用起來(lái)也很方便。只是折光率較低，對(duì)像的質(zhì)量略有影響。

    （6）固定液。不能用自身產(chǎn)生熒光或抑制熒光的物質(zhì)作為固定液，福爾馬林和酒精是比較安全的固定液，但不要使標(biāo)本長(zhǎng)時(shí)間浸入福爾馬林中，石蠟也常常會(huì)發(fā)生熒光。

    （7）粘著劑。貼切片用的蛋白甘油粘著劑也會(huì)產(chǎn)生熒光，因而要以蒸餾水代替。較好的方法是冰凍切片，但熒光物質(zhì)具有水溶性時(shí)有流出的危險(xiǎn)。

（8）眼睛的保護(hù)。用明視野透射光觀察熒光時(shí)，大部分紫外線就能直接通過(guò)目鏡而傷害眼睛。為了防止紫外光，目鏡上面可以裝設(shè)保護(hù)鏡（撼光鏡），以吸攻紫外光。當(dāng)用暗視野集光器進(jìn)行熒光觀察時(shí)，必須注意不要使物鏡的數(shù)值孔徑過(guò)大，否則，紫外光仍會(huì)進(jìn)入眼睛。使用落射光照明裝置是防止紫外線傷害作用的有效方法。